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植物总蛋白提取试剂
植物总蛋白提取试剂
货号：ZK-PL3506
描述：
植物组织成分复杂含有较多的酚类物质、多糖、色素、次生代谢产物，这使得植物蛋白质的分离提取变得困难。本试剂适用于多种植物根、茎、叶及果实等的新鲜或冻存组织，能够快速有效地提取植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除组织中所含的多糖、脂质、此生代谢产物等干扰蛋白研究的成分，同时能够使提取的蛋白质处于最佳的活性状态和检测状态，适用于酶学活性测定，单向、双向蛋白电泳、Western Blot和免疫共沉淀等实验。
适用范围：
提取多种植物组织和细胞如苹果、花生、土豆、烟叶、菠菜、梅花等。
储存：
4ºC避光保存，12个月有效
规格：
50ml 100ml
操作步骤；
1. 组织匀浆，必须充分匀浆，这一步非常关键。
（1） 冻存组织匀浆：预先将研钵至于-20ºC或-70ºC冰箱内预冷。取液氮冻存的植物组织，放入冰冻的研钵内研磨成粉末，注意使样本处于冰冻状态，如样本颜色加深或变黑通常表明已经融化。将研磨好的组织转移到新管，按每200mg植物组织加0.5mL比例加入提取试剂，混匀后冰上放置20分钟，期间可数次颠倒混匀，使蛋白溶解。
（2） 新鲜组织匀浆：取新鲜组织放入研钵中，按每200mg植物组织加0.5mL比例加入提取试剂，充分研磨至匀浆液中看不到大的块状或者片状组织，保证样本完全研磨破碎。转移至离心管内，冰上放置20分钟。
2. 离心：12000g离心15分钟，将上清液转移至新的离心管中，直接使用或-70ºC储存。
3. 后续处理：
（1） 如果进行酶学测定，直接取蛋白上清液加入反应。
（2） 沉淀蛋白；首先估计制备的蛋白上清液体积。方法一：加1/3体积30%三氯醋酸水溶液；方法二：加入6-10倍体积的1:1混合的丙酮/乙醇,-20ºC沉淀1小时或过夜。4ºC，5000g离心10分钟，弃上清，空气略干沉淀，用适量的1*SDS上样缓冲液溶解沉淀，95 ºC变性5分钟，上样电泳。适于进行SDS-PAGE、Western Blot、双向电泳等。
（3） 直接电泳：需加入4*SDS上样缓冲液。上清如有少量色素一般不会影响蛋白电泳。
（4） 免疫共沉淀：用蒸馏水等比例稀释提取的蛋白上清，进行免疫共沉淀。
（5） 蛋白定量：用BCA蛋白定量试剂盒进行定量
常见问题集解决方法：
1. 提取的蛋白量少：
1）组织蛋白含量较少，如水果等，可增加组织量；
2）组织匀浆不充分，如纤维较多的组织破碎较困难，应适当延长研磨时间；
3）组织过老或水分丢失致使其干燥，应尽量选用新鲜较嫩的组织；
4）甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶解不充分，应延长溶解时间或使用较强的蛋白溶解剂。
2. 蛋白质量不佳：
1）提取的蛋白有多酚或色素等杂质残留，可重复用丙酮或甲醇沉淀；
2）蛋白质降解，操作个步骤应迅速，在冰上进行，用户也可以自行选择加入蛋白酶抑制剂。
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